华西医学期刊出版社
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找到 关键词 包含"成骨分化" 41条结果
  • 富白细胞和血小板血浆对BMSCs在兔股骨头缺血性坏死中成骨作用的影响

    目的探讨富白细胞和血小板血浆(leucocyte- and platelet-rich plasma,L-PRP)在治疗早期股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)兔模型中,对BMSCs成骨分化作用的影响。 方法取4~6月龄新西兰大白兔24只,体重2.0~3.0 kg,雌雄不拘。随机分成A、B、C、D 4组(n=6),建立双侧ANFH模型。取髂骨骨髓分离培养BMSCs并鉴定;采用Landesberg方法制备L-PRP。ANFH动物模型修复方法:A组单纯行髓芯减压,B组行髓芯减压联合L-PRP移植,C组行髓芯减压联合BMSCs移植,D组行髓芯减压联合BMSCs及L-PRP移植。术后2、4、8周摄X线片,观察髋关节和骨缺损灶骨密度变化,并行Lane-Sandhu X线评分评价成骨情况;取各组股骨头标本,行组织学观察及血管计数、新生骨面积百分比检测。 结果影像学及组织学观察均显示各组骨缺损呈现不同程度骨再生。术后2、4、8周,Lane-Sandhu X线片评分、血管计数、新生骨面积百分比均显示:C、D组明显优于A、B组,D组优于C组,B组优于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论L-PRP在治疗兔ANFH模型中对BMSCs成骨分化有促进作用,为临床髓芯减压联合BMSCs及L-PRP治疗ANFH奠定了理论基础。

    发表时间:2016-08-25 10:18 导出 下载 收藏 扫码
  • BMP-2基因重组慢病毒载体转染猪BMSCs成骨分化研究

    目的构建 BMP-2基因重组慢病毒载体,并检测其转染猪BMSCs 后BMP-2表达活性及诱导BMSCs成骨分化情况,为进一步构建组织工程骨软骨奠定基础。 方法取2只2月龄巴马香猪(体重约15 kg)髂骨骨髓,采用密度梯度离心法分离培养BMSCs,并传代。利用基因重组技术构建 BMP-2基因重组慢病毒载体,并以感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、25、50、100、200转染第2代BMSCs,通过荧光显微镜及倒置相差显微镜观察确定最佳MOI值。以最佳 MOI 值感染 BMSCs作为实验组,空载体转染的 BMSCs(空载体组)及未转染的 BMSCs(空白组)作为对照,通过 RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot检测 BMP-2 mRNA及蛋白在 BMSCs 中的表达,并应用ALP染色、ALP活性检测及茜素红钙结节染色检测其成骨分化情况。 结果经RT-PCR基因测序鉴定 BMP-2基因重组慢病毒载体构建成功,转染 BMSCs后荧光显微镜下可见绿色荧光表达,且MOI值为 100 时为最佳表达。RT-PCR 提示 BMP-2 基因成功转染至 BMSCs 中;免疫组织化学染色及 Western blot检测示转染后BMSCs并可持续、稳定、高效表达 BMP-2蛋白;培养后2周BMSCs可见ALP表达及钙结节形成。 结论成功构建 BMP-2基因重组慢病毒载体并转染猪 BMSCs,BMP-2 基因转染入 BMSCs 后能持续、稳定、高效表达 BMP-2 基因和蛋白,并成功诱导 BMSCs 向成骨细胞分 化。

    发表时间:2016-08-31 04:05 导出 下载 收藏 扫码
  • 微小RNA-451靶向调节钙结合蛋白39对MSCs成骨分化的促进效应

    目的探讨微小RNA-451(micro RNA-451,miRNA-451)靶向调节钙结合蛋白39(calcium binding protein 39,CAB39)表达,促进MSCs向成骨细胞分化的效应。 方法选择pMIR-report质粒及pRL-TK质粒,通过双荧光素酶基因报告系统,鉴定CAB39是否为miRNA-451的靶基因。将pre-miRNA-451(A组)及anti-miRNA-451(C组)分别转染到C3H10T1/2细胞中,同时设置相应的pre-miRNA阴性对照组(B组)和anti-miRNA阴性对照组(D组);成骨诱导培养7、14 d,采用实时荧光定量PCR检测成骨标志物Runx2、ALP mRNA相对表达量;诱导培养14 d,采用Western blot检测细胞中CAB39蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况。 结果经鉴定,CAB39是miRNA-451的靶基因。实时荧光定量PCR检测示,成骨诱导培养7、14 d,A组Runx2、ALP mRNA相对表达量显著高于B组,C组显著低于D组,差异均有统计学意义(P lt; 0.05)。成骨诱导培养14 d,Western blot检测示A组CAB39蛋白表达量为0.55 ± 0.05,较B组1.00 ± 0.07明显降低;而C组为1.21 ± 0.05,较D组1.00 ± 0.04明显增高;差异均有统计学意义(P lt; 0.05)。茜素红染色示A组细胞外钙基质沉积较B组明显增多,而C组细胞外钙基质沉积较D组明显减少。 结论miRNA-451可通过抑制CAB39表达,促进MSCs成骨分化。

    发表时间:2016-08-31 04:12 导出 下载 收藏 扫码
  • 不同浓度地塞米松诱导脂肪干细胞成骨分化的实验研究

    目的 地塞米松是MSCs 成骨诱导分化的基础试剂,探讨诱导脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)成骨分化过程中地塞米松的优选浓度,为进一步骨组织工程研究提供理论依据。 方法 3 月龄清洁级健康新西兰大白兔5 只,雌雄不限,体重2 ~ 3 kg。取腹股沟区皮下脂肪4 ~ 6 mL,采用胶原酶消化离心贴壁法分离培养ADSCs,取第3 代细胞进行实验。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;联合CD44、CD106 免疫荧光染色和成脂诱导分化鉴定ADSCs。调整细胞密度为1 × 105 个/mL,分别用普通培养液(A 组)及含0(B 组)、1 × 10-9(C 组)、1 × 10-8(D 组)、1 ×10-7(E 组)、1 × 10-6(F 组)、1 × 10-5 mol/L(G 组)地塞米松的成骨诱导培养液对ADSCs 进行培养。MTT 法检测细胞增殖情况;RT-PCR 检测诱导细胞骨钙素(osteocalcin,OC)和核心结合因子α1(core binding factor α1,Cbfα1)的表达;测定ALP 活性及矿化面积百分率;对矿化结节行茜素红染色。 结果 ADSCs 形态多为梭形、多角形,呈“漩涡状”排列;表面抗原分子CD44 呈阳性,CD106 呈阴性,成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成,油红O 染色呈阳性。MTT 检测显示随地塞米松浓度升高,吸光度(A)值呈下降趋势;其中成骨诱导5、7 d 时,D、E 组A 值比较差异有统计学意义(P lt; 0.05)。RT-PCR 检测示,成骨诱导7 d OC 和Cbfα1 mRNA 的表达分别在E 组和D 组达高峰;成骨诱导14 d ALP 活性和矿化面积百分率均在D 组达高峰,随后逐渐下降。D、E 组间OC 和Cbfα1 mRNA 的表达量、ALP 活性及矿化面积百分率比较差异均无统计学意义(P gt; 0.05),与其余各组比较差异均有统计学意义(P lt; 0.05)。成骨诱导14 d,G 组细胞均死亡;茜素红染色除A、G 组外均呈阳性。 结论 成骨培养液中地塞米松浓度为1 × 10-8 mol/L 时,能在减少对细胞增殖抑制的同时,更有效地诱导ADSCs 成骨分化。

    发表时间:2016-08-31 05:42 导出 下载 收藏 扫码
  • 辛伐他汀对幼鼠骨小梁中骨形成相关因子表达以及BMSCs 成骨分化的影响

    目的 既往研究表明辛伐他汀具有促成骨作用,现探讨辛伐他汀对幼鼠骨小梁中骨形成相关因子表达以及BMSCs 成骨分化的影响。 方法 40 只1 周龄雄性SD 大鼠,体重17.5 ~ 19.5 g,随机分为2 组,每组20 只。实验组于大鼠颈部皮下注射辛伐他汀注射液[5 mg/(kg·d)],对照组同法注射等剂量生理盐水。于注射后1、3 周,两组分别脱颈处死10 只大鼠,采用免疫组织化学染色检测胫骨上端骨小梁BMP-2、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)、VEGF 的表达情况。注射后1、3 周,两组分别取大鼠双侧股骨,采用全骨髓培养法体外分离培养BMSCs,取第1 代BMSCs 成骨诱导培养,培养后14 d 行ALP 染色,培养后21 d 采用实时荧光定量PCR 检测BMP-2、Runx2、Osterix、Msx2、Dlx3、Dlx5 mRNA 的表达,培养后28 d 行von Kossa 染色。 结果 免疫组织化学染色示注射后1、3 周两组胫骨上端骨小梁BMP-2、MMP-13、VEGF 表达,差异均无统计学意义(P gt; 0.05)。成骨诱导培养14 d,注射后1、3 周两组ALP染色阳性细胞百分比差异均无统计学意义(P gt; 0.05);成骨诱导培养21 d,实时荧光定量PCR 检测示注射后1、3 周两组BMP-2、Runx2、Osterix、Dlx3、Dlx5、Msx2 mRNA 表达水平比较差异均无统计学意义(P gt; 0.05);成骨诱导培养28 d,注射后1、3 周两组钙结节单位面积比差异均无统计学意义(P gt; 0.05)。 结论 皮下注射辛伐他汀5 mg/(kg·d)后1、3 周对幼鼠骨小梁中骨形成相关因子表达以及BMSCs 成骨分化无明显影响。

    发表时间:2016-08-31 05:42 导出 下载 收藏 扫码
  • 基于快速成形的磷酸钙多孔陶瓷成骨性能初步研究

    目的 磷酸钙生物材料由于其优良的生物相容性而具有广阔的应用前景,但传统方法难以制备具有复杂形状的支架。以快速成形方法制备磷酸钙多孔陶瓷支架材料,并对其体外成骨性能进行初步研究。 方法 采用快速成形方法制备磷酸钙多孔陶瓷支架材料(直径10 mm、高度5 mm、孔径800 μm),取Beagle 犬髂骨髓分离培养BMSCs,接种第3 代BMSCs 于支架材料上。将实验分为4 组,A 组为成骨诱导培养的细胞/ 材料复合物组,B 组为未经成骨诱导培养的细胞/ 材料复合物组,另设平皿成骨诱导培养及常规培养为阳性对照组(C 组)及阴性对照组(D 组)。于接种后第1、3、7 天,利用DNA 定量检测方法及ALP 定量、定性检测方法检测BMSCs 在支架材料上的增殖及ALP 的表达;并经DiO 荧光染色后,应用激光共聚焦显微镜观察BMSCs 在材料上的黏附生长情况。 结果 DNA定量结果表明,随培养时间增加,C、D 组在第3 天时细胞生长进入平台期;A、B 组细胞呈持续增长趋势,细胞培养过程中增殖速度均略低于C、D 组,且未出现明显的平台期。DiO 荧光染色示,BMSCs 在以快速成形方法制备的磷酸钙多孔陶瓷支架材料上黏附、生长状态良好。ALP 染色示,随培养时间延长,A、B 组支架上细胞染色均逐渐加深,A 组各时间点染色程度均明显强于B 组。培养后第1、3 天,4 组ALP 表达均较低,差异无统计学意义(P gt; 0.05);培养第7 天,各组ALP 表达均明显升高,A 组比其他各组明显高表达(P lt; 0.05),B 组及C 组均明显高于D 组(P lt; 0.05)。 结论 快速成形的多孔磷酸钙陶瓷具有良好的细胞相容性,BMSCs 与支架复合在体外诱导培养可以进行成骨分化。因此通过快速成形技术制备的磷酸钙多孔陶瓷是骨组织工程可选的细胞支架。

    发表时间:2016-08-31 05:48 导出 下载 收藏 扫码
  • Hedgehog 信号通路对MSCs 的调控

    目的 综述Hedgehog 信号通路对MSCs 的增殖和多向分化的调控。 方法 查阅并综合分析近年有关Hedgehog 信号通路对MSCs 生物学特性调控的文献,并进行综述。 结果 Hedgehog 信号通路促进MSCs 的增殖,并在其成骨、成软骨分化中发挥重要作用,抑制其成脂分化。 结论 Hedgehog 信号通路对MSCs 增殖与多向分化调控的功能可作为组织或器官缺血、骨质疏松、软骨发育不全和肥胖症等新的治疗靶点。

    发表时间:2016-08-31 05:48 导出 下载 收藏 扫码
  • 低温冻存对人脂肪来源干细胞成骨能力影响的实验研究

    目的 脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)是组织工程种子细胞的重要来源之一。探讨低温保存对hADSCs 体外生长特性及成骨分化潜能的影响,验证冻存后的ADSCs 作为组织工程骨种子细胞的可行性。 方法 取自愿捐献的经脂肪抽吸术获取人脂肪组织,采用胶原酶消化法分离hADSCs。取第2 代hADSCs 置于— 196℃液氮保存4 周后,37℃复苏并测定细胞存活率。实验分为两组,实验组为低温保存的hADSCs,对照组为未经低温保存的hADSCs;均用成骨诱导液诱导培养。采用DNA 定量(Hoechst33258 荧光比色法)测定细胞体外增殖活性,ALP 染色及茜素红染色法测定ALP 活性和Ca2+ 含量,观察低温冻存对细胞成骨能力的影响。 结果 低温冻存复苏后的hADSCs 存活率为90.44% ± 2.62%。两组细胞数量随成骨诱导时间延长不断增加,7 d 达平台期;ALP 表达活性也不断增加,于成骨诱导11 d 达平台期,且2 周时ALP 染色均呈阳性;成骨诱导3 周时两组茜素红染色均呈强阳性反应。两组各时间点细胞数量、ALP 活性和Ca2+ 含量比较差异均无统计学意义(P gt; 0.05)。 结论 低温保存的hADSCs 体外生长及成骨能力未发生显著变化,可以作为组织工程骨的种子细胞。

    发表时间:2016-09-01 09:03 导出 下载 收藏 扫码
  • 瘦素对hBMSCs 成骨分化的作用及机制研究

    目的 探讨瘦素(leptin,LEP)对 hBMSCs 成骨分化的作用及机制。 方法 采用全骨髓法培养hBMSCs,取第3 代hBMSCs 分为A、B、C、D、E、F 组,待细胞贴壁后各组分别加入400、200、100、50 ng/mL LEP 、100 ng/ mL BMP 和普通培养基2 mL 进行培养。于培养后7 d 行ALP 染色、21 d 行矿化结节染色,倒置相差显微镜观察染色结果;并于培养后7、14、21 d,检测各组ALP 活性、骨钙素(osteocalcin,OCN)水平,筛选 LEP 的最佳诱导浓度;B、E、F 组细胞培养7 d 后,采用 RT-PCR 检测成骨相关基因:核心结合因子(core-binding factor α1,Cbfα1)、ALP、Col Ⅰ、OCN mRNA 的表达。 结果 诱导培养7 d,ALP 染色结果显示,A、B、C、D、E 组细胞胞浆均呈蓝色阳性着色,F 组呈弱阳性;诱导培养21 d,矿化结节染色结果显示,A、B、C、D、E 组细胞染色呈阳性,F 组呈阴性。B 组培养后7、14、21 d,ALP、OCN 活性低于 E 组,但显著高于其余各组,差异均有统计学意义(P lt; 0.05),200 ng/mL LEP 为最佳浓度。B、E、F组细胞培养7 d,F 组Cbfα1、ALP、Col Ⅰ、OCN mRNA 均不表达;B、E 组各产物mRNA 均有表达,但B 组低于E 组。 结论 LEP 可促进 hBMSCs 成骨分化,其机制可能为LEP 促进了成骨相关基因的表达

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
  • 成骨细胞特异性钙黏蛋白涂布脱钙骨基质材料对BMSCs 黏附及成骨分化能力的影响

    目的 探讨成骨细胞特异性钙黏蛋白(cadherin ectodomain Ⅱ,Cad- Ⅱ)涂布于同种异体脱钙骨基质材料(freeze-dried demineralized bone matrix,FDBM)对兔BMSCs 黏附、增殖及成骨分化能力的影响。 方法 取4 周龄日本大耳白兔10 只,体重0.61 ~ 0.88 kg,雌雄不限,常规分离培养BMSCs。取第2 代BMSCs(细胞密度1 × 106 个 /mL)分别与经Cad- Ⅱ修饰的FDBM(实验组)和未经Cad- Ⅱ修饰的FDBM(对照组)复合,行MTT 检测细胞增殖能力,细胞黏附实验检测细胞上架率和上架数,倒置相差显微镜、扫描电镜及HE 染色观察细胞生长情况。另取第2 代BMSCs(细胞密度5 × 105 个/mL)分别与经Cad- Ⅱ修饰的FDBM(实验组)和未经Cad- Ⅱ修饰的FDBM(对照组)复合培养,行ALP 活性检测和骨钙素免疫组织化学染色观察细胞成骨分化情况。 结果 MTT 检测发现BMSCs 在经Cad- Ⅱ修饰的支架材料上能正常增殖,但与对照组比较差异无统计学意义(P gt; 0.05)。实验组细胞上架率为87.41% ± 5.19%,明显高于对照组35.56% ± 1.75%(P lt; 0.01);对照组每片材料细胞上架数平均为 2.6 × 104 个,实验组平均高达5.0 × 105 个,明显多于对照组(P lt; 0.05)。倒置相差显微镜、扫描电镜及HE 染色观察均显示实验组支架上黏附细胞数量明显多于对照组。成骨诱导培养7 d,实验组和对照组细胞均可表达骨钙素,具有成骨细胞表型;培养14 d,实验组和对照组ALP 活性分别为29.33 ± 1.53 和18.31 ± 1.32,骨钙素免疫组织化学染色阳性率分别为83% ± 7% 和56% ± 7%,两组比较差异均有统计学意义(P lt; 0.01);与同组7、21 d 比较差异有统计学意义(Plt; 0.01),7 d 与21 d 组间及组内比较差异均无统计学意义(P gt;0.05)。 结论 Cad- Ⅱ修饰的FDBM 对BMSCs 增殖无明显促进作用,但能提高细胞黏附性,并促进BMSCs 向成骨细胞分化。

    发表时间:2016-09-01 09:06 导出 下载 收藏 扫码
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