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找到 关键词 包含"内皮祖细胞" 18条结果
  • 重组腺病毒介导β半乳糖苷酶基因转染内皮祖细胞的实验研究

    目的 测定重组腺病毒介导β半乳糖苷酶基因对内皮祖细胞的转染率,为利用人类单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVTK)基因转染内皮祖细胞治疗肺癌提供依据。 方法 将转染β半乳糖苷酶(LacZ)的重组腺病毒AD5F35(AD5F35LacZ)加入培养有内皮祖细胞的24孔板,转染内皮祖细胞。转染后用LacZ检测试剂盒染色,计算转染率。结果 在光学显微镜下观察,蓝色细胞为AD5F35LacZ基因转染成功的内皮祖细胞。在不同感染复数MOI的前提下,腺病毒对内皮祖细胞的转染率是不同的,在一定的范围内,转染率随MOI的增大而增大,在MOI达到400时,转染率最大,为98.38%±1.25%。 结论 重组腺病毒可成功转染内皮祖细胞,转染率随MOI的增大而增大,当感染复数为400时转染率最大。

    发表时间:2016-08-30 06:06 导出 下载 收藏 扫码
  • 人骨髓内皮祖细胞的分离、诱导培养和扩增

    摘要: 目的 探讨并改进从人骨髓中分离、诱导培养和体外扩增内皮祖细胞(EPCs)的方法,为EPCs参与基础研究和临床应用奠定基础。 方法 采用不同的细胞分离液,用密度梯度离心法从正常人骨髓中分离单个核细胞(hBMMNCs),分别培养在包被人纤维连接蛋白(HFN包被组),包被明胶(明胶包被组)和未包被(未包被组)的培养皿内,利用EBM-2培养4~7d后出现细胞克隆集落(cell colony-forming units,CFUs),挑选内皮祖细胞样CFUs继续培养(CFUs挑选法),采用流式细胞仪检测CD34+ KDR+和CD133+ KDR+双荧光阳性细胞,细胞免疫化学法检测EPCs表面标记CD133、CD34、CD31、vWF和KDR的表达。 结果 用OptiprepTM分离液可从人骨髓中更有效地分离出hBMMNCs,进而诱导获取更多EPCs并可进行体外培养扩增;流式细胞仪检测结果显示CD133+ KDR+细胞高达70.4%±5.4%, CD34+KDR+细胞高达69.1%±8.7%;HFN包被组和明胶包被组细胞生长一样旺盛,均可促进EPCs的贴壁生长,促进其生长的作用差异无统计学意义(Pgt;0.05),而未包被组细胞生长数量最少。培养7d的贴壁细胞表面标记CD133、CD31、vWF和KDR均呈阳性,培养14d 的贴壁细胞表面标记CD34呈阳性。 结论 CFUs挑选法可以从人骨髓中成功地获取更多EPCs并在体外扩增,提出了另一种获取EPCs的高效简单方法,进一步拓宽了获取EPCs的方法和范围。

    发表时间:2016-08-30 06:08 导出 下载 收藏 扫码
  • 自体内皮祖细胞移植对急性心肌梗死近、中期心肌收缩力的影响

    目的比较自体内皮祖细胞(EPCs)移植急性心肌梗死区域后近、中期心功能恢复的程度。方法将SD大鼠120只随机分为实验组和对照组(每组60只),抽取自体外周血,体外分离出内皮祖细胞。开胸结扎左冠状动脉前降支,实验组用自体内皮祖细胞经局部注射移植入急性心肌梗死区域;对照组以IMDM(Iscove's modified Dulbecco's Medium)作对照。术后3、6周、6、8和12个月取标本,体外药物刺激离体肌条检测心肌收缩情况。免疫组织化学法、计算机图象分析检测组织血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维生长因子(bFGF),血管内皮第八因子(Ⅷ因子)的表达。结果实验组梗死区3、6周、6个月bFGF、VEGF灰度值明显高于对照组(P〈0.01),微血管计数较对照组明显增多(P〈0.01),心肌收缩力明显较对照组增强(P〈0.01),且随时间推移恢复程度增加(P〈0.05)。但从8个月开始,实验组以上指标不再明显增加。结论自体内皮祖细胞移植可能通过血管发生、血管新生等方式增加心肌细胞的收缩力,但中期疗效并不能随着时间推移而持续增加,在较长时间内保持稳定。

    发表时间:2016-08-30 06:23 导出 下载 收藏 扫码
  • 辛伐他汀募集内皮祖细胞归巢促进骨缺损修复的研究

    目的 研究局部植入辛伐他汀对兔颅骨极限骨缺损的修复作用及对血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)归巢的影响,探讨辛伐他汀促进骨缺损修复的作用机制。 方法 将辛伐他汀50 mg 加聚乳酸200 mg 以及单纯聚乳酸200 mg 分别溶解于1 mL 丙酮,制备辛伐他汀- 聚乳酸复合材料及单纯聚乳酸材料。取2 只雄性新西兰大白兔骨髓以体外贴壁法培养EPCs,将第3 代EPCs 制备为2 × 106 个/mL 细胞悬液,采用性别错配移植,经耳缘静脉移植至12 只雌性新西兰大白兔,每只兔各2 mL。移植3 d 后于12 只雌性兔颅骨制备直径15 mm 的骨缺损,分别将辛伐他汀- 聚乳酸复合材料(实验组,n=6)及单纯聚乳酸材料(对照组,n=6)植入骨缺损部位。术后观察兔一般情况,于8 周后行大体观察并摄X 线片检测颅骨缺损修复情况;采用血管明胶墨汁灌注染色、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测血管生成及EPCs 归巢情况。 结果 两组实验动物均存活至实验完成。术后8 周实验组骨缺损处有质硬组织生成,X 线片示不规则高密度影,组织学观察见新骨组织,FISH 检测血管数量较多,血管壁可见移植的含Y 染色体的阳性细胞。对照组骨缺损处仅纤维结缔组织覆盖,X 线片示低密度软组织影,组织学观察未见新骨形成,且仅在移植物周边见少量血管,FISH 检测未见含Y 染色体的阳性细胞。实验组及对照组新骨形成百分比分别为91.63% ± 4.07% 及59.45% ± 5.43%,差异有统计学意义(P lt; 0.05)。 结论 局部植入辛伐他汀可以促进骨缺损修复,其作用机制与其动员EPCs 归巢至骨缺损部位、促进血管生成及最终促进骨形成有关。

    发表时间:2016-08-31 05:49 导出 下载 收藏 扫码
  • 纳米多孔PLLA 膜对晚期内皮祖细胞行为的影响

    目的 观察晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在纳米多孔PLLA 膜表面黏附、增殖的情况,为优化组织工程血管支架材料提供一种新途径。 方法 新西兰大白兔,体重2.5 ~ 3.0 kg,雌雄不限。取兔外周血分离和培养晚期EPCs。采用静电纺丝技术制备纳米无序纤维、有序纤维及超级有序纤维,行低温等离子体技术改性及Ⅰ型胶原表面涂覆,制备无序膜、有序膜及超级有序膜。实验分为A(单纯细胞)、B(无序膜)、C(普通膜)、D(有序膜)、E(超级有序膜)组,将原代晚期EPCs(1 × 105 个/mL)复合至支架材料培养,3、5、7、9、11、13、15 和17 d 后MTT法检测细胞增殖能力;实验分A(无序膜)、B(普通膜)、C(有序膜)、D(超级有序膜)4 组,取浓度为1 × 105 个/mL 的第3 代晚期EPCs 悬液3 mL 滴加至膜上,复合培养4、12 和24 h 后沉淀法检测细胞黏附率,1、3、7 d 测定细胞增殖率,并于复合培养后4、24、72 h 观察细胞形态变化。 结果 纳米PLLA 纤维直径300 ~ 400 nm,孔隙率gt; 90%。培养后3、5、7、9、11、13、15 和17 d,各组A 值均随培养时间延长而增高,细胞生长良好;A、B 组间各时间点比较差异无统计学意义(P gt;0.05),培养后5 ~ 17 d,C、D、E 组与A、B 组间比较差异均有统计学意义(P lt; 0.05)。复合培养4 h,A 组黏附率高于B、C、D 组,差异有统计学意义(P lt; 0.05);12 h 及24 h,B、C、D 组黏附率明显高于A 组,差异有统计学意义(P lt; 0.05);各组4 h 与12、24 h 比较差异均有统计学意义(P lt; 0.05),12 h 与24 h 比较差异无统计学意义(P gt; 0.05)。复合培养1、3 和7 d,B、C、D 组增殖率明显高于A 组,差异有统计学意义(P lt; 0.05);B、C、D 组间除培养后1 d,其余各时间点比较差异均有统计学意义(P lt; 0.05)。形态学观察示细胞在各支架膜上生长良好,A 组及B 组细胞生长较散在、杂乱;C、D 组细胞沿纤维定向附着、伸展、增殖并分泌ECM,D 组细胞结构保持更好。 结论 纳米多孔PLLA 有序膜及超级有序膜支架能促进种子细胞在材料表面黏附、增殖,并能较好保持细胞形态,是一种理想的血管组织工程支架材料;晚期EPCs 是一种理想的血管组织工程种子细胞。

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
  • 犬内皮祖细胞内衬脱细胞带瓣膜静脉支架与犬天然静脉瓣膜在生理条件下闭合机制的比较

    目的 比较犬内皮祖细胞内衬脱细胞带瓣膜静脉支架与犬天然静脉瓣膜在生理条件下的闭合机制。 方法 普通雄性杂种犬36 只,体重15 ~ 18 kg,取12 只犬左侧带瓣膜股静脉制备脱细胞带瓣膜静脉支架。将余24 只动物随机分为实验组和对照组(n=12),取实验组骨髓进行体外扩增培养获取内皮祖细胞,取第3 代细胞以5 ×106 个 / mL 密度种植于支架上,行种植细胞前后支架大体及HE 染色观察。实验组于左侧股静脉部位移植同种异体内皮祖细胞内衬脱细胞带瓣膜静脉支架,对照组原位移植自体带瓣膜静脉。术后4 周通过彩色超声多普勒检查,比较动物由平卧位升至头高脚低位,瓣膜关闭前后瓣膜远端血流方向和流速的改变,以及瓣窦部位静脉管径的变化情况。 结果 种植细胞前后支架大体及HE 染色示,经脱细胞处理的带瓣膜静脉支架能较好地保留其纤维和胶原结构,经生物反应器可于体外成功将内皮祖细胞种植于脱细胞支架上。动物于头高脚低位至瓣膜开始关闭时,实验组均出现血液返流现象,返流流速(1.4 ± 0.3)cm/s;对照组未出现血液返流现象,但血液流速下降,由高峰流速(21.3 ± 2.1)cm/s 减至(18.2 ± 3.3)cm/s。对照组瓣膜的活动周期、开始闭合时间及瓣膜从开始闭合到完全闭合的时间分别为(918 ± 46)、(712 ± 48)、(154 ± 29) ms,实验组分别为(989 ± 53)、(785 ± 43)、(223 ± 29)ms,两组比较差异均有统计学意义(P lt; 0.05)。瓣膜关闭完全后,两组均未见返流。实验组和对照组瓣膜关闭前后瓣膜窦部静脉管径均有所增大,增大比例分别为116.8% ± 2.0% 和118.5% ±2.2%(P gt; 0.05)。 结论 犬内皮祖细胞内衬脱细胞带瓣膜静脉支架与天然静脉瓣膜在生理条件下的闭合条件有明显差异,前者依赖于血液返流,后者与血液流速减慢及瓣窦段静脉压力增高有关。

    发表时间:2016-09-01 09:08 导出 下载 收藏 扫码
  • 骨髓刺激对大鼠骨髓源内皮祖细胞的影响

    目的 观察大鼠骨髓刺激后骨髓源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能的改变,探讨采用骨髓刺激后骨髓干细胞移植提高下肢缺血性疾病疗效的可能机制。 方法 取12 只SPF 级雄性Lewis 大鼠,体重200 ~ 250 g,按是否皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子注射液分为刺激组和对照组(n=6)。取骨髓单个核细胞用EBM-2 培养液进行诱导分化,培养7 d 后对贴壁细胞采用异硫氰酸荧光素- 荆豆凝血素1 和DiI 标记的乙酰化低密度脂蛋白染色进行EPCs 鉴定及计数;同时采用黏附能力测定实验观察EPCs 的黏附能力。另取12 只SPF 级雄性Lewis 大鼠制备单侧后肢缺血模型,在模型制备后3 d 将8 × 106 个EPCs 移植至缺血侧后肢的肌肉内,按照移植EPCs来源不同将后肢缺血大鼠分为刺激组和对照组(n=6)。EPCs 移植3 周后行后肢血管造影,计算缺血侧后肢侧支血管数目。 结 果 大鼠骨髓单个核细胞培养7 d 后刺激组EPCs 数量为(145.2 ± 37.0)个/HP,大于对照组(95.2 ± 39.4)个 /HP(P lt; 0.05);刺激组黏附EPCs 数量为(21.8 ± 4.3)个/HP,大于对照组(15.0 ± 5.2)个/HP(P lt; 0.05)。大鼠骨髓源EPCs移植至缺血肢体后3 周,刺激组EPCs 移植后缺血侧后肢侧支血管数目为(4.2 ± 1.2)个,大于对照组的(2.7 ± 0.8)个(P lt;0.05)。 结 论 骨髓刺激使骨髓源EPCs 数量增加、功能改善,可能是骨髓刺激后骨髓干细胞移植提高下肢缺血性疾病疗效的机制之一。

    发表时间:2016-09-01 09:18 导出 下载 收藏 扫码
  • 两种分离培养小鼠骨髓来源内皮祖细胞方法的比较

    【摘要】 目的 比较密度梯度离心法及全骨髓培养法分离培养内皮祖细胞的差异。方法 取4周雄性近交系C57BL/6J小鼠骨髓,分别使用密度梯度离心法及全骨髓培养法培养,观察细胞贴壁情况和细胞形态,并行DiIacLDL及FITCUEAI双染、vWF、eNOS及细胞表面标志检测。结果 密度梯度离心法培养细胞可形成典型铺路石样改变及形成血管样结构;而全骨髓培养法贴壁细胞形态多样,较多呈长梭形铺展生长,部分细胞呈类圆形及纺锤形。比较两种方法培养细胞摄取DiIacLDL、结合FITCUEAI双阳性率以及vWF、eNOS及细胞表面标志表达阳性率,差别均有统计学意义(Plt;005)。应用密度梯度离心法,随着培养时间延长,表达CD34、CD133及FLk1细胞逐渐增多(Plt;005)。结论 密度梯度离心法及全骨髓培养法在EGM2MV培养体系下均可培养出内皮祖细胞,但密度梯度离心法较全骨髓培养法培养的内皮祖细胞纯度高。

    发表时间:2016-09-08 09:37 导出 下载 收藏 扫码
  • Galectin-3 对外周血内皮祖细胞源性血管内皮细胞增殖能力的影响

    目的 观察重组人半乳糖凝集素-3 (Galectin-3)对外周血内皮祖细胞源性血管内皮细胞增殖能力的影响。方法 提取人外周血内皮祖细胞,将其定向诱导为成熟血管内皮细胞,加入不同终浓度的Galectin-3进行培养,观察不同浓度Galectin-3对外周血内皮祖细胞源性内皮细胞增殖能力的影响。结果 0.1、1.0、2.5、5.0和10.0μg/ml浓度组外周血内皮祖细胞源性内皮细胞的增殖能力均高于0μg/ml组,其中0.1,1.0及2.5μg/ml浓度组与0μg/ml组比较差异无统计学意义(P>0.05),而5.0及10.0 μg/ml组细胞增殖能力明显高于0、0.1、1.0及2.5μg/ml组,差异有统计学意义(P<0.05),10.0μg/ml浓度组细胞增殖能力又明显高于5.0μg/ml浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Galectin-3可促进体外培养的外周血内皮祖细胞源性血管内皮细胞的增殖能力。

    发表时间:2016-09-08 10:38 导出 下载 收藏 扫码
  • 外周血来源内皮祖细胞三维血管新生模型的建立及其特性分析

    目的 观察内皮祖细胞(EPC)在血管新生中的作用及其生物学特性。方法 取大鼠外周血分离出EPC,观察其在体外的培养和扩增情况,对培养的EPC进行检测,同时建立三维立体模型并分析。结果 成功分离出外周血中的EPC,在平面培养时,各时间点经VEGF诱导的EPC(实验组)其增殖情况均优于无VEGF诱导的EPC(对照组),P<0.01。在由鼠尾胶原凝胶制成的三维基质中EPC向胶原基质内生长,1 d内即可出现向胶原内的出芽及浸润,并逐渐形成分支样结构; 实验组生长快,向胶原基质内浸润速度快、出芽快,管状结构粗大; 而对照组生长慢、出芽慢,管状结构细小,向胶原内浸润的深度浅,网状结构稀疏,不完整; 实验组各时相三维基质中新生血管数目均多于对照组(P<0.01)。结论 鼠尾胶原凝液可以诱导EPC参与血管新生的迁移、增殖、发芽等步骤; EPC三维基质模型可用于新生血管的研究。VEGF能动员和诱导EPC促进血管新生。

    发表时间:2016-09-08 10:57 导出 下载 收藏 扫码
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